BOD5測定通常采用標準稀釋與接種法(GB 7488--87)，其操作為，經(jīng)中和及除去毒性物質(zhì)并經(jīng)稀釋后的水樣(必要時加入適量含好氧微生物的接種液)置入培養(yǎng)瓶中，于在20oC暗處培養(yǎng)5d，通過分別測定培養(yǎng)前后水樣中溶解氧的含量，來計算出5d內(nèi)的耗氧量，再根據(jù)稀釋倍數(shù)求得其BOD5。
BOD5的測定是生物作用和化學作用的共同結(jié)果，必須嚴格按照操作規(guī)范進行，變更任何一個條件，都將影響測定結(jié)果的準確性和可比性。影響B(tài)OD5測定的條件包括pH值、溫度、微生物種類和數(shù)量、無機鹽含量、溶解氧和稀釋倍數(shù)等。
化驗BOD5的水樣必須充滿并密封于取樣瓶中，在2～5oC的冷藏箱內(nèi)保存到分析時。一般應(yīng)在采樣后6h內(nèi)進行檢驗，在任何情況下，水樣的貯存時間不能超過24h。
測定工業(yè)廢水的BOD5時，由于工業(yè)廢水通常溶解氧含量較少而且成分多為可生化降解的有機物，為保持培養(yǎng)瓶內(nèi)的好氧狀態(tài)，必須將水樣稀釋(或接種稀釋)，這一操作是標準稀釋法的最大特征。為確保測得結(jié)果的可靠性，對于稀釋后的水樣培養(yǎng)5d的耗氧量必須大于2mg/L，殘留溶解氧必須大于1mg/L。
投入接種液是為了保證有一定量的微生物降解水中的有機物，接種液的量以使5日耗氧0.1mg/L以下為佳。使用由金屬蒸餾器制備的蒸餾水作為稀釋水時，應(yīng)注意檢查其中的金屬離子含量，以避免因此抑制微生物繁殖和代謝。為確保稀釋水中溶解氧接近飽和，必要時可通入凈化空氣或純氧，然后于在20oC培養(yǎng)箱中放置一定時間，使之與空氣中氧分壓達到平衡。
稀釋倍數(shù)的確定是以培養(yǎng)5日耗氧大于2mg/L，剩余溶解氧大于1mg/L為原則。稀釋倍數(shù)過大或過小，都會導(dǎo)致檢驗失敗。而且由于BOD5分析周期較長，一旦出現(xiàn)類似情況，就無法以原樣補測。初測某一工業(yè)廢水的BOD5時，可以首先測定其CODCr，然后查閱參考已有的水質(zhì)類似的廢水的有關(guān)監(jiān)測數(shù)據(jù)，初步確定待測水樣BOD5/CODCr值，據(jù)此推算出BOD5的大致范圍和確定稀釋倍數(shù)。
對含有抑制或殺滅好氧微生物代謝活動的物質(zhì)的水樣，直接用通常方法測定BOD5的結(jié)果會偏離實際值，必須在測定前做相應(yīng)的預(yù)處理，這些對BOD5測定有影響的物質(zhì)和因素包括重金屬及其他有毒的無機物或有機物、余氯等氧化性物質(zhì)、pH值過高或過低等。
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