稀釋水的質量對BOD5的測定結果的準確性意義重大，因此要求稀釋水空白5日耗氧必須小于0.2mg/L，最好能控制在0.1mg/L以下，接種稀釋水5日耗氧應在0.3~1.0mg/L之間。
保證稀釋水質量的關鍵在于控制其有機物的含量最低和抑制微生物繁殖的物質含量最低，因此最好使用蒸餾水作為稀釋水，不宜使用離子交換樹脂制得的純水作為稀釋水，因為去離子水往往含有從樹脂中分離出的有機物。如果制備蒸餾水的自來水中含有某些揮發性有機物，為預防其殘留在蒸餾水中，就應在蒸餾前進行去除有機物的預處理。由金屬蒸餾器制得的蒸餾水，應注意檢查其中的金屬離子含量，以免發生抑制微生物的繁殖和代謝，影響BOD5測定結果的準確性。
如果所用稀釋水因含有有機物而不符合使用要求時，可采取加入適量曝氣池接種液后，在室溫或20oC條件下貯存一定時間的方法予以消除影響。接種的量以5d耗氧約0.1mg/L為原則，為防止藻類繁殖，貯存必須在暗室中進行。如果貯存后的稀釋水有沉渣，只能取用上清液，可過濾去除沉渣。
為確保稀釋水的溶解氧接近飽和，必要時可用真空泵或水射器吸入經凈化的空氣，也可用微型空壓機注入經凈化的空氣，還可用氧氣瓶通入純氧，然后將經過充氧的稀釋水在20oC培養箱中放置一定時間，使溶解氧達到平衡。冬季在較低室溫放置的稀釋水可能含有過多的溶解氧，夏季高溫季節則恰好相反，因此在室溫與20oC有明顯差別時，一定要放置在培養箱內穩定一段時間，使之和培養環境的氧分壓平衡。
